所有行為記錄和編碼均使用諾達思的動物運動軌跡跟蹤系統(tǒng)(EthoVision XT)進行。為了記錄超聲波發(fā)聲(USV)的頻率,將一個超聲麥克風(fēng)懸掛在實驗籠上方或固定在墻壁上,通過諾達思的聲音行為分析系統(tǒng)(UltraVox XT)進行處理和分析。
母親隔離誘導(dǎo)的幼鼠USV測試
母鼠及其同窩幼崽適應(yīng)實驗房間,然后將母鼠與它們的同窩幼崽隔離。測試包括:將PND 7幼崽引入測試室,并使用懸掛在測試室中心上方5 cm處的超聲麥克風(fēng)記錄5分鐘內(nèi)產(chǎn)生的USV呼叫率(隔離1)。之后,將幼崽放入包含其母鼠的籠子中3分鐘(母子重聚)。最后,將幼崽重新進入測試室,并再次記錄5分鐘的USV(隔離2)。
家庭氣味辨別和偏好測試
在上一個測試后5分鐘進行。每個PND 7的幼崽被單獨放置在測試籠的中心,籠子底部鋪有網(wǎng)狀地板,其中一側(cè)放放有干凈墊料,另一側(cè)放有家庭墊料。測量探索每側(cè)的時間和超聲波發(fā)聲的頻率,持續(xù)2分鐘。
青少年社交測試
實驗小鼠被放入測試籠中,進行10分鐘的習(xí)慣化適應(yīng)。一旦將社交刺激小鼠引入籠子,就會記錄實驗組和刺激組的幼年小鼠(失明和有視力)所表現(xiàn)出的社交行為、非社交行為以及USV,記錄時間為10分鐘。
雌性尿液誘導(dǎo)的USV和氣味標(biāo)記行為
采集雌性發(fā)情期小鼠尿液樣本。將來自雌性小鼠的尿液滴在紙上,并將雄性小鼠放入實驗籠后開始測試。對總的超聲波發(fā)聲次數(shù)、總的嗅覺標(biāo)記次數(shù)、探索雌性尿液所花費的時間以及總的移動距離進行錄像,并分析。為了量化嗅覺標(biāo)記,在紙上放置一個帶有1平方厘米方格的透明網(wǎng)格,并記錄每個被尿液標(biāo)記的方格被計為一個氣味標(biāo)記單位,統(tǒng)計整個籠子和雌性尿液斑點周圍氣味標(biāo)記總數(shù)。